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現(xiàn)貨供應:TaKaRa反轉錄試劑盒PrimeScript™RT reagent Kit(RR037A)

 更新時間:2023-10-24 點擊量:2246

Takara是一家總部位于日本京都的生物醫(yī)藥企業(yè),起源于1841年,正式創(chuàng)立于1925年。該公司主要從事研究試劑、科學儀器、保健食品以及基因和細胞治療產(chǎn)品(CDMO)的研發(fā)和銷售。

對于生命科學工作者來說,Takara應該不陌生,其提供的限制性內切酶和聚合酶是實驗室中常用試劑。Takara也是世界上shou批提供生命科學科研用試劑以及商用PCR儀器和試劑的企業(yè)。

TaKaRa逆轉錄試劑盒是一種將RNA逆轉錄為cDNA的專用試劑。RNA的純度可以影響cDNA的合成量,而制備RNA的關鍵就是要抑制細胞中的RNA裂解酶,并防止所用儀器和試劑中RNA裂解酶的污染。因此,在實驗中必須采取以下措施:戴一次性干凈手套;使用RNA操作專用實驗臺;在操作過程中避免講話等等。通過以上辦法可以防止實驗者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。制品中附加了標準曲線制作用稀釋液EASY Dilution(for Real Time PCR)Total RNAcDNA稀釋至低濃度時也能夠進行準確稀釋,容易在寬廣范圍內獲得準確定量的標準曲線。

提取的Total RNA中常?;煊谢蚪MDNA,而基因組DNA可以直接作為PCR模板進行擴增,造成解析結果不準確。為了避免這種情況發(fā)生,我們必須采取如下兩種措施:1、引物設計時避免基因組DNA擴增;2、使用DNase I處理除去基因組DNA。

1、引物設計時避免基因組DNA擴增

我們可以利用基因組DNA具有外顯子和內含子的結構,在引物設計上下工夫,使PCR反應時不能擴增基因組DNA。此時我們首先應確認目的基因的基因組結構,選擇較長的內含子。然后,在這個內含子兩側的外顯子上分別設計上、下游引物。Real Time PCR反應時通常擴增的目的DNA片段長度都比較短設置的條件也是適合短片段DNA的擴增,超過500bp就很難擴增了。所以,當內含子足夠長時,基因組DNA來源的擴增就不能發(fā)生:當內含子較短時,基因組DNA來源的擴增可能發(fā)生,但基因組DNA來源的擴增產(chǎn)物比mRNA來源的擴增產(chǎn)物長,可通過分析融解曲線的方法加以區(qū)分。但是,此種方法不適合具有單個外顯子的基因、或者不具有內含子的生物種以及基因組情報沒被解析的生物種等,此時必須采取方法2解決。

2、使用DNase I處理除去基因組DNA

使用常規(guī)方法提取Total RNA后,再使用DNase I分解混入的基因組DNA,最后進行苯酚/氯仿抽提乙醇沉淀等純化Total RNA。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司現(xiàn)貨供應TaKaRa逆轉錄試劑盒PrimeScript RT reagent Kit(RR037A),歡迎選購!


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